NADPH-細(xì)胞色素 C 還原酶（NCR）試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明：細(xì)胞色素 P450 酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。NCR 作為 P450 酶系的重要一員，催化氧化型 P450 還原再生。 NCR 催化 NADPH 還原氧化型細(xì)胞色 c 生成還原型細(xì)胞色素 c，還原型細(xì)胞色素 c 在 550nm 處有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定 550nm 吸光度的增加速率，來(lái)計(jì)算 NCR 活性。

自備儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)、普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提?。?1、除去細(xì)胞核和線粒體等：稱約 0.5g 組織，加入 4℃預(yù)冷的 1mL 試劑一，冰上充分研磨，10000g 4℃離心 30min，取上清液，轉(zhuǎn)移到超速離心管中。 2、粗制微粒體：4℃，100000g，離心 60min，棄上清液。 3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟 2 的沉淀中加 1mL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100000g 離心 30min，棄上清液。 4、終微粒體：向步驟 3 的沉淀中加試劑二 0.5mL，蓋緊后充分震蕩溶解，4℃保存待測(cè)。

二、測(cè)定操作： 1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 550nm，蒸餾水調(diào)零。 2. 試劑二在 37℃水浴中預(yù)熱 30min。 3. 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 50μL 蒸餾水、900μL 試劑二、50μL 試劑三和 10μL 試劑四，迅速混勻后于 550nm 處測(cè)定 2min 內(nèi)吸光值變化，第 10s 和第 130s 吸光值分別記為 A1 和 A2，△A 空白管=A2-A1。 4. 測(cè)定管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 50μL 粗酶液、900μL 試劑二、50μL 試劑三和 10μL 試劑四，迅速混勻后于 550nm 處測(cè)定 2min 內(nèi)吸光值變化，第 10s 和第 130s 吸光值分別記為 A3 和 A4，△A 測(cè)定管=A4-A3。
 

注意事項(xiàng)：試劑三、試劑四臨用前配制，配好未使用完的 4℃可保存兩天。